熒光分光光度計激發波長的選擇

該怎么確定激發波長與發射波長呢？對許多儀器初學者來說，這是個令人感到困擾的問題。如果儀器有三維掃描功能，那就比較簡單，放樣品進去，按照說明書要求做三維熒光掃描，可以很方便地確定出合適的激發波長與發射波長。如果儀器沒有三維掃描功能，一般的方法如下。
首先，將儀器的激發波長（λex）先設定為200nm，然后進行發射(EM)模式掃描，發射波長（λem）掃描范圍暫設定為210-800nm，記錄所有出現的峰值波長；改變激發波長（λex）后再掃描，如第二次發射圖譜中的某個（或某些）峰的位置沒有位移（或位移很少），一般來說這個（或這些）峰就是熒光峰；因為熒光峰的位置是不隨激發波長的改變而改變的，僅是峰高（或峰面積）發生改變。
然后，將確定的熒光峰的波長作為發射波長（λex）固定下來，再做激發波長(EX)的掃描，激發波長的范圍要小于發射波長；如果僅出一個激發峰則很簡單確立下來，再將這個波長固定下來重新做真正的發射波長(EM)掃描，可以得到具有良好信噪噪比的結果；如果做激發波長(EX)掃描后出現幾個峰，則根據經驗來選擇，一般應選擇峰形、高度適合且有一定帶寬的峰作為激發波長。也可以參考熒光光譜的特性——激發光譜與發射光譜呈鏡像的特點來確定激發波長。